明街五十四巷是 1980 年代台北市内常见的一条平凡死巷，而住在这条巷子里的几户人家又生活得特别紧密，像是巷口经营冰果室的李家、父亲是管区的方家、家中开诊所的向家，还有隐藏家庭秘密的陈家。这四家人里有纯外省人、有纯台湾人、有各掺一半的，还有掺半客家人。即使他们背景各异，却有一个共通点，那就是家里都有一个五十四年次的女儿，并且都比儿子要惹人注目。
方中强(那维勋 饰)和向光正(张兆志 饰)是铁哥儿们，但偏偏光正的未婚妻月霞(李佩甄 饰)却搞砸了中强和宝琴(王琄 饰)的新婚之夜，於是宝琴和月霞闹翻，直到三年后，光正将诊所搬到中强家对面，而宝琴和月霞在同一天生了女儿以安(白歆惠 饰)和千千(Linda 饰)，两个女人终於和好，另国强和光正鬆了口气，只是女人心海底针，两个女人人还是常常会为了小事而一言不合。
宝琴和月霞因为盼到了个女儿而欣喜不已，相反地，陈家妈妈贵美(琇琴 饰)却因为生了玉婷(李佳豫 饰)而心灰意冷，因为唯有生男孩才能让她的细姨身份稍微提高一些，而这是一个不能说破的秘密，也造成了长子品章(李运庆 饰)的叛逆。
以安、千千、玉婷三个女孩出生在同一年，而那一年正是台湾经济开始自给自足的时候，但三个女孩一出生就注定在不同起跑点上。
方家女儿以安遗传了山东人的高头大马，个性丝毫没有在注重家教的方妈妈期待下而变成淑女，凡事喜欢强出头，正义感有餘，但判断力不足；向家的女儿千千长得最美，人见人爱，身为独生女，被父母宠得娇滴滴的，拥有 54 巷第一个芭比娃娃，世界只围著她转；陈家的女孩玉婷长相最平凡，但却是五十四巷里最会唸书的孩子，可偏偏母亲是个没有名分的细姨，从小生长在重男轻女的家庭，只能自卑又无声地承受著母亲发在她身上的怨怒。
三个个性迥异的女孩在十岁那年，以安为了替千千抢回心爱的芭比娃娃而出头，和品章联手把小霸王成才(郝劭文 饰)的头打破一个洞，从此名震五十四巷，但也因此，以安、千千、玉婷发誓从此要相互扶持、永不分离。就在大家都认为以安是这条巷子的孩子王时，来路不明的李家搬到 54 巷，似乎拥有神秘力量又聪明乐观不向坎坷命运低头的佩芬(戴君竹 饰)，却因为帮眾人讨回了生平第一笔赚的钱，而渐渐地成为了眾人崇拜的对象。於是， 54 巷的四个女孩在时代的潮流上，迎向属於她们的闪亮的日子，她们的故事就由此开始…